陜西 新疆 西藏 呂經(jīng)理 13277046520
東北 山東 四川 云南 劉經(jīng)理:15623218067
浙江 江蘇 上海 安徽 劉經(jīng)理:15072499150
湖北 湖南 江西 李經(jīng)理:15827301505
廣西 貴州 廣東 福建 殷經(jīng)理:18771934194
河南 河北 北京 山西 天津 胡經(jīng)理:18707163327
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原代細(xì)胞是指從不同機(jī)體(人、大鼠、小鼠、兔子等等)中取出不同的組織進(jìn)行機(jī)械破碎或者各種酶液進(jìn)行消化,分成單個細(xì)胞后,在體外進(jìn)行細(xì)胞的培養(yǎng)。原代細(xì)胞因為來源機(jī)體組織樣本,所以保留了很多機(jī)體的生理功能,非常適合實驗材料的應(yīng)用研究。在生物研究廣泛的應(yīng)用于,分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、基因組學(xué)、蛋白質(zhì)學(xué)等等。伯韜生物可以提供200多種人源原代細(xì)胞和動物來源原代細(xì)胞,其中還會根據(jù)客戶需求提供不同的針對性的細(xì)胞鑒定。 培養(yǎng)方法與步驟: 細(xì)胞培養(yǎng)是生物學(xué)和醫(yī)學(xué)研究最常用的手段之一,分為原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)兩大類。原代培養(yǎng)也叫初代培養(yǎng),是指由體內(nèi)取出組織或細(xì)胞進(jìn)行的首次培養(yǎng),適于做細(xì)胞形態(tài)、功能和分化等研究。 細(xì)胞培養(yǎng)要遵循嚴(yán)格的步驟,任何一步的忽視都有可能導(dǎo)致細(xì)胞培養(yǎng)失敗。 原代細(xì)胞培養(yǎng)具體步驟如下: 1、準(zhǔn)備:取各種已消毒的培養(yǎng)用品置于凈化臺面,紫外線消毒20分鐘。開始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。 2、布局:點(diǎn)燃酒精燈,安裝吸管帽。 3、處理組織:把組織塊置于燒杯中,用Hanks液漂洗2-3次,去除血污;如懷疑組織可能污染,可先置于含有青鏈霉素的混合液中浸潤2-10分鐘。 4、剪切:用眼科剪把組織切成2-3毫米大小的塊,以便于消化。加入比組織塊總量多3-5倍的胰蛋白酶液,然后一并倒入三角燒瓶中,結(jié)扎瓶口或塞以膠塞。 5、消化:用恒溫水浴,或置于37℃溫箱消化均可,消化中每隔20分鐘應(yīng)搖動一次,如用恒溫攪拌器消化更好。消化時間依組織塊的大小和組織的硬度而定。 6、分離:在消化過程中見消化液混濁時,可用吸管吸出少許消化液在鏡下觀察,如組織已分散成細(xì)胞團(tuán)或單個細(xì)胞,立即終止消化,隨即通過適宜不銹鋼篩,濾掉尚未充分消化開的組織塊。低速(500-1000轉(zhuǎn)/分)離心5分鐘,吸出上清,加入適量含有血清的培養(yǎng)液。 7、計數(shù):用計數(shù)板計數(shù),如細(xì)胞懸液細(xì)胞密度過大,再補(bǔ)加培養(yǎng)液調(diào)整后,分裝入培養(yǎng)瓶中。對大多數(shù)細(xì)胞來說,pH要求在7.2-7.4范圍,培養(yǎng)液呈微紅色,如顏色偏黃,說明液體變酸,可用NaHCO3調(diào)整。 8、培養(yǎng):培養(yǎng)箱要求穩(wěn)定的溫度(37°C)、穩(wěn)定的CO2水平(5%)、較高的相對飽和濕度(95%)。 原代細(xì)胞培養(yǎng)是成功傳代之前的培養(yǎng),是建立各種細(xì)胞系(株)必經(jīng)的階段。假如原代培養(yǎng)能夠維持幾小時甚至更長,即可進(jìn)行進(jìn)一步篩選。
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